货号： TD420-25
供应商： 天漠科技
英文名： TIANMO1BIOTECH
保质期： 1年
保存条件： 常温
规格： 25次
质粒DNA中量提取试剂盒  Catalog No.   TD420-25 (25次反应)       TD420-50 (50次反应)                产品组成: 试剂盒组成保存25次50次 RNase   A －20℃2.1 mg 4.1 mg P14℃210 ml410 ml P2 室温210ml410 ml P3（黄色）室温210 ml410 ml 质粒DNA结合液室温210 ml410 ml 质粒DNA洗涤液1室温质粒DNA洗涤液2室温质粒DNA洗脱液室温10ml20ml 3号P柱套装室温25个50个 注射器套装室温25个50个 收集管室温25个50个 
 20 ml              40 ml             
10 ml            20 ml                  第一次使用前按说明加指定量乙醇
  产品特点: 
  • 独有的显色反应，可以直接观察到细胞裂解中和的程度，极大方便操作者判断其状态。
  • 快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好， 且内毒素含量极低，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序 转染等各种分子生物学实验。
  • 此产品仅供科研使用。
 注意事项:
  • 环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
  • 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
  • 溶液P3和结合液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
  • 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
    •    特性: 
    • DNA 纯度: 获得的质粒产量高、纯度好， 可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等
    • 。一般情况Abs260/280 ≥ 1.8  ，Abs260/230 ≥ 2.0，内毒素含量小于1EU/µg。
    • 质粒DNA产量: 每次可提取到约 300ug ，主要依据质粒的拷贝数，培养物的成长环境等因素。
    • 质粒DNA大小: 最高可达25 kb。
    • 洗脱体积: ≥ 100 µl。
    • 操作温度: 室温 (15-30°C)。
    • 操作时间：20分钟
            溶液制备:（使用之前需要配制） 
  • 第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml）置于2-8℃保存。
    • 如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。试用装的P1已添加过RNaseA 
  • 试用装 的 质粒DNA洗涤液 2已经添加乙醇无需添加。
    • 25次反应的 质粒DNA洗涤液2 应添加40 ml 100%的乙醇到10ml的质粒DNA洗涤液2中。50次反应的 质粒DNA洗涤液 2应添加80 ml 100%的乙醇到15ml的质粒DNA洗涤液2中。     加入后请及时在方框打钩标记，以免多次加入!     操作步骤: 
  • 取50 ml过夜培养的菌液，在≥ 3,400 x g离心力下离心10分钟，尽可能的倒干上清，收集菌体。
  • 用8ml溶液P1重悬菌体沉淀，可用吸头反复吹打或涡旋振荡至彻底悬浮。  
    • （如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。）
  • 加8ml的溶液P2，温和地上下翻转4 -7次使菌体充分裂解，室温放置2-3分钟。
    • （温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂！所用时间不应超过5分钟！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠，如果菌体少，很快清亮粘稠后就可以做下一步。）
  • 加8ml溶液P3，立即温和地上下翻转4 -7次，中和完全后会出现黄色絮状沉淀。（中和完全后溶液完全呈现为黄色）
  • 将一个50ml离心管放在离心管架子上准备收集过滤液，然后把注射器下端的接头拧开并将上一步混合物慢慢倒入注射器内，将注射器推杆推入注射器内慢慢推动收集过滤液（大约会收集到20ml左右的过滤液）。
  • 然后在过滤液中加入8ml质粒DNA结合液，盖上盖子颠倒10次左右使其混匀。
    •  以下步骤可以通过真空负压的方式也可以通过离心的方式进行操作（负压设备所用真空多连器推荐美国ZYMO RESEARCH公司）  负压操作步骤：1．确认3号柱P（连接15ml和50ml套筒）连接紧密后放置在负压多连器上，倒入第6步的混合液，打开真空开关使液体完全通过柱子。2．去掉15ml和50ml套筒，拧开3号柱P上面的紫色盖子。3．关掉真空开关，倒入800ul质粒DNA洗涤液1，打开真空开关，让液体完全通过3号柱P。4．关掉真空开关，加入800ul质粒DNA洗涤液2（请先检查是否已加入无水乙醇!）到3号柱P内，打开真空开关让液体完全通过柱子。5．重复第4步。6．将3号柱P套在2ml收集管上，然后放置在台式离心机上在≥ 10,000 x g 条件下空转2分钟以去除残留乙醇。7．将3号柱P套在一个干净的1.5ml离心管内，添加100ul的质粒DNA洗脱液到柱基质上。（洗脱液事先在 65-70℃水浴中预热，洗脱效果更好），室温放置2分钟，在≥ 10,000 x g 条件下离心1分钟来洗脱质粒DNA。  离心操作步骤：1．确认3号柱P（连接15ml套筒）连接紧密后放置在一个50ml离心管里，倒入14ml第6步的混合液，500 x g离心力下离心2分钟，倒掉离心管中的废液，重复此步骤直到混合液全部倒净。2．去掉15ml和50ml套筒，拧开3号柱P上面的紫色盖子，并将3号柱P套入到收集管内。3． 加入800ul质粒DNA洗涤液1到3号柱P内，500 x g离心力下离心2分钟，弃废液。4．加入800ul质粒DNA洗涤液2（请先检查是否已加入无水乙醇!），500 x g离心力下离心2分钟，弃掉废液。5．重复第3步。6．将3号柱P套在2ml收集管上，然后放置在台式离心机上在≥ 10,000 x g 条件下空转2分钟以去除残留乙醇。7．将3号柱P套在一个干净的1.5ml离心管内，添加100ul的质粒DNA洗脱液到柱基质上。（洗脱液事先在 65-70℃水浴中预热，洗脱效果更好），室温放置2分钟，在≥ 10,000 x g 条件下离心1分钟来洗脱质粒DNA。  温馨提示：不可用于临床治疗。